弓形虫RH株热应激蛋白40基因的克隆与原核表达

摘要：

为研究弓形虫热应激蛋白40(TgHSP40)的生物学特性,采用RT-PCR方法从弓形虫RH株中扩增出TgHSP40基因片段,并将其克隆到原核表达载体pET-30a(+)后转化入表达菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,应用Western-blot对重组蛋白的反应原性进行分析.结果显示,重组菌可表达出分子质量约46 ku的重组融合蛋白,在37℃、IPTG浓度为1.0 mmol/L、诱导6h的情况下表达效果最好.重组蛋白经纯化后进行的Western-blot分析证实,表达、纯化的弓形虫RH株HSP40蛋白具有良好的反应原性,与弓形虫基因Ⅰ型的RH株、基因Ⅱ型的PRU株以及基因型为ToxoDB9的TgC7株和GJS株的阳性血清均可发生特异性反应,预期可作为弓形虫病ELISA诊断方法的候选抗原.本研究结果为弓形虫病新型诊断方法的建立奠定了基础.

关键词：弓形虫、HSP40蛋白、克隆、原核表达、反应原性

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分类号：S852.723(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31230073,31172316;甘肃省创新研究群体计划项目1210RJIA006

在线出版日期：2014-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：73-77