环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白基因侧翼序列的hiTAIL-PCR扩增及其生物信息学分析
为扩增环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白基因的侧翼序列,从感染环形泰勒虫的淋巴细胞系中提取RNA,反转录合成第1链cDNA.以该cDNA为模板,利用高效热不对称交互PCR法(hiTAIL-PCR)进行扩增,将目的片段连接到pGEM-T Easy载体并进行测序.结果显示,获得了环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白基因的5’端侧翼序列,该序列编码894个氨基酸.生物信息学分析结果表明,该蛋白具有信号肽,信号肽剪切部位位于第19~20个氨基酸残基之间,很可能是一种分泌蛋白;经TMHMM2.0预测,该蛋白在第875~892位氨基酸残基部位具有典型的跨膜结构;Motif scan预测的结果显示,环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白存在2处N-糖基化位点(153NLSF、333NESM)和15处CK2蛋白激酶磷酸化位点;在该蛋白第500~650位氨基酸残基部分具有较高的抗原性,推测可能是该蛋白与其他蛋白发生相互作用的区域.
环形泰勒虫、RT-PCR、微线体-棒状体蛋白、hiTAIL-PCR、生物信息学分析
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S852.723(动物医学(兽医学))
国家自然科学基金资助项目31272556,31101621;农业部肉牛牦牛项目CARS-38;国家重点基础研究发展计划973项目2010CB530206;国家引进国际先进农业科学技术计划948项目2010-S04;家畜疫病病原生物学国家重点实验室项目;欧盟EPIZONE项目FOOD-CT-2006-016236;ASFRISK项目211691;AR-BOZOONET项目211757;PIROVAC项目KBBE-3-245145
2014-04-14(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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