J亚群禽白血病病毒嵌套式PCR检测方法的建立及其应用

摘要：

根据GenBank中ALV-J亚群HPRS103株(登录号:Z46390.1)gp85蛋白基因序列,设计合成了2对引物,建立了针对ALV-J亚群的嵌套式PCR检测方法.外侧引物PCR扩增片段的大小为960 bp,内侧引物PCR扩增片段的大小为766 bp.筛选嵌套式PCR的最佳反应条件,并进行了特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床检测比较.结果显示,建立的嵌套式PCR方法能扩增ALV-J亚群特异性片段,而对禽网状内皮组织增殖病病毒、马立克氏病病毒、H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒、传染性腔上囊病病毒和减蛋综合征病毒的扩增结果均为阴性;该方法第一轮和第二轮扩增的敏感性分别为1 fg/μL和0.1 fg/μL,第二轮扩增的敏感性比第一轮的高10倍;通过对32份临床样品的检测,嵌套式PCR的检出率与病毒分离方法的检出率相同,且高于参考PCR的检出率18.7％.结果表明,本研究建立的嵌套式PCR方法具有敏感性高、重复性好、特异性强等优点,可用于ALV-J亚群的临床诊断.

关键词：禽白血病病毒、嵌套式PCR、检测

所属期刊栏目：43

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：青岛市科技计划基础研究项目11-2-4-5-＜11＞-jch

在线出版日期：2014-02-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1285-1290