小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株磷蛋白的表达及磷酸化位点的预测
为深入研究小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)P蛋白对病毒复制的影响,以小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株为研究对象,通过RT-PCR法扩增P基因,将扩增出的P基因克隆到pGEX-6P-1原核表达载体中,成功构建pGEX-6P-1-PPRV-P表达载体,测序鉴定无误后转化至表达宿主菌BL21 (DE3) plysS中进行IPTG诱导表达,并通过在线软件预测了P蛋白的磷酸化位点.结果显示,pGEX-6P-1-PPRV-P重组菌在IPTG浓度1.0 mmol/L时经37℃诱导4h,目的基因可正确表达,并以可溶性的形式存在.经Western-blot鉴定,目的蛋白可与PPRV Nigeria75/1株病毒小鼠阳性血清发生特异性的免疫印迹反应,证明表达的蛋白具有较好的反应原性.经综合预测分析,可能被磷酸化的位点有46个,其中PKC、PKA、CKII/CKI、cdc2可能作用的位点分别为15个、7个、10个、6个,其他激酶作用位点可能为8个.结果表明,P蛋白的克隆表达及磷酸化位点的成功预测为小反刍兽疫病毒的深入研究奠定了基础.
P蛋白、小反刍兽疫病毒、原核表达、磷酸化位点
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S852.65(动物医学（兽医学）)
国家自然科学基金资助项目31172342;国家公益性行业科研专项200903037
2014-02-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
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