水貂阿留申病病毒VP2蛋白基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达

摘要：

为了得到结构和功能近似于天然的水貂阿留申病病毒G株(ADV-G)的衣壳蛋白VP2,将ADV-G的VP2基因5’端添加His标签后克隆到杆状病毒转移载体(pFastBacl)后转化入大肠杆菌DH10Bac中重组,筛选重组成功的克隆进行菌液扩增,获得重组的杆粒(Bacmid),然后用重组杆粒转染昆虫细胞(sf9),获得重组的杆状病毒.用P3代病毒感染sf9细胞,接毒后第48小时进行免疫荧光试验,结果,检测到特异的绿色荧光,证实目的蛋白得到成功表达.Western-blot分析结果显示,表达的VP2蛋白能够与His标签单抗和ADV阳性血清产生特异性免疫印迹反应.经过对流免疫电泳(CIEP)验证,在敏感性、特异性、重复性、稳定性方面,表达的VP2蛋白与商业抗原有一致的表现.采用超速离心法对病毒液进行浓缩后,在电子显微镜下可见约为20 nm的病毒样颗粒(VLPs).以上试验结果表明,ADV VP2蛋白在昆虫杆状病毒中得到有效表达,并具有良好的反应原性.

关键词：水貂、阿留申病病毒、VP2基因、结构蛋白、昆虫杆状病毒表达系统

所属期刊栏目：43

分类号：S852.659.2(动物医学（兽医学）)

资助基金：中国农业科学院基本科研业务费预算增量项目2013ZL037;吉林省畜牧业管理局青年科研基金项目吉牧科字第201010号

在线出版日期：2014-02-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1246-1251