牛环形泰勒虫诊断性靶基因片段的筛选及鉴定

摘要：

通过对牛环形泰勒虫Tamsl基因的不同片段进行克隆表达,以期得出该基因疏水区对蛋白表达的影响及筛选的目的蛋白作为ELISA抗原的特异性.利用3对不同的特异性引物对Tams1基因的三段区域(全长基因、无N端及C端疏水区、仅缺乏N端的疏水区)进行克隆,最终构建三种重组表达载体.经电泳分析筛选获得可溶性表达重组质粒,目的蛋白经亲和层析纯化后进行Western-blot分析.结果显示,在37℃条件下,经终浓度为1 mmol/L IPTG诱导表达4h后,无疏水区的靶重组质粒表达出53 ku的可溶性蛋白,其表达量达1.39 mg/mL;而含全长基因或C端疏水区的质粒分别表达55 ku、56 ku的包涵体蛋白.Western-blot分析结果表明,筛选得到的可溶性蛋白能被环形泰勒虫阳性血清特异性识别,具有良好的反应原性.结果表明,该蛋白可作为潜在的进行牛环形泰勒虫病流行病学调查的候选抗原.

关键词：牛环形泰勒虫、Tamsl基因片段筛选、重组质粒、可溶性蛋白

所属期刊栏目：43

分类号：S852.723(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目U1170301;新疆维吾尔自治区国际科技合作计划项目20126008

在线出版日期：2014-02-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1231-1235