与猪圆环病毒2型基因组茎环结构相互作用的宿主细胞蛋白的筛选

摘要：

利用酵母单杂交技术对猪圆环病毒2型(PCV2)基因组复制起始处茎环结构序列与PK-15细胞中的互作蛋白进行了筛选和鉴定.首先将合成的PCV2复制起始处的茎环结构序列整合到酵母染色体中构建诱饵酵母菌株;采用SMART技术合成PK-15细胞cDNA文库,将总cDNA与pGADT7-Rec表达载体共同转化酵母诱饵菌株,通过同源重组在酵母细胞内同步进行cDNA文库的构建,以药物筛选阳性克隆;通过酵母菌落PCR得到阳性克隆中的cDNA插入片段,通过序列分析对此予以确认.本试验成功地构建了酵母单杂交文库,筛选出1.01×106个酵母克隆,其中196个为阳性克隆.经PCR产物测序,并通过NCBIBlast法进行序列比对,确定有4种蛋白可与PCV2基因组茎环序列发生作用.本研究从宿主细胞cDNA文库中筛选到4种可与PCV2基因组茎环序列发生作用的蛋白,为下一步阐明这些宿主蛋白对PCV2复制的调节作用奠定了基础.

关键词：猪圆环病毒2型、茎环结构、宿主细胞、互作蛋白

所属期刊栏目：43

分类号：S852.651(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目31101837

在线出版日期：2014-02-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1211-1216