奶牛分枝杆菌的分离鉴定与耐药性分析

摘要：

为优化分枝杆菌PCR诊断方法并监测牛分枝杆菌耐药性,本研究采用罗氏培养基自奶牛淋巴结和肺中分离分枝杆菌,优化本课题组建立的两级多重PCR方法用于分离菌株的分子诊断.一级PCR为两重PCR,靶标16 S rRNA进行属和群的鉴定；二级PCR为七重PCR,根据结核分枝杆菌复合群(Mycobacte-rium tuberculosis complex,MTBC)成员染色体缺失区域的差异,设计了7对引物,依据群内不同种各自呈现特定的扩增谱型进行种的鉴定.对MTBC分离株,全菌水平用绝对浓度法对4种抗结核一线药物(RFP、INH、EMB、SM)进行药敏试验；分子水平用PCR扩增耐药基因rpoB、katG、inhA、embB、rrs,并测序分析.结果显示,本试验共分离出14株分枝杆菌,一级PCR鉴定均为分枝杆菌属成员,其中8株为MTBC成员.二级PCR中,这8株均呈现相同的扩增谱型,均为牛分枝杆菌谱型.药敏试验和耐药基因检测结果一致,8株牛分枝杆菌分离株对4种抗结核病一线药物全部敏感,基因序列分析未见突变.结果表明,本研究优化的两级多重PCR方法具有快速可靠和低成本的优势,是目前国内最新的分子诊断方法.

关键词：分枝杆菌、结核分枝杆菌复合群、分离鉴定、耐药性

所属期刊栏目：43

分类号：S852.618(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目31260616

在线出版日期：2013-11-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：828-832