靶向enJSRV env基因shRNA真核表达质粒的构建及其干扰效率的测定

摘要：

为探讨绵羊内源性反转录病毒(enJSRV)在绵羊胚胎发育过程中的作用,利用脂质体将pEGFPC1空载体转入绵羊绒毛膜滋养层细胞中,测定其转染效率.同时构建抑制enJSRV env基因的RNA干扰质粒,并将其转染到能稳定表达enJSRV env基因的绵羊绒毛膜滋养层细胞中,通过荧光定量PCR检测其干扰效率.结果显示,重组干扰质粒enJRSV-env-shRNA-1、enJRSV-env-shRNA-2、enJRSV-env-shRNA-3、enJRSV-env-shRNA-4、Negative-shRNA构建成功.Lipofectamine LTX脂质体体积为6.0 μL,转染混合物体积为100 μL,转染48 h组的转染效率最高,为42.37％.与正常对照组细胞的enJSRV-env mRNA表达量相比,转染靶基因干扰质粒的各组绵羊绒毛膜滋养层细胞中enJSRV-env mRNA表达量分别下调了73.56％、66.82％、33.66％和18.16％.筛选出了一个干扰效率最高的RNA干扰质粒enJRSV-env-shRNA-1,为以后包装慢病毒及进行动物试验来揭示enJSRV的生殖生物学作用奠定了坚实的基础.

关键词：滋养层细胞、RNA干扰、转染、实时荧光定量PCR、内源性绵羊肺腺瘤病毒

所属期刊栏目：43

分类号：S852.659.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31160493,30960271;内蒙古科技创新引导基金项目20101808;教育部博士点基金博导类项目20111515110008

在线出版日期：2013-03-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：53-59