鸡毒支原体醛缩酶的原核表达及膜定位鉴定

摘要：

为了探明醛缩酶在支原体中的定位,根据已发表的鸡毒支原体醛缩酶(fba)基因序列设计特异性的引物,以鸡毒支原体Rlow株基因组为模板,通过Overlap PCR点突变扩增鸡毒支原体醛缩酶fba基因,将fba克隆至pET-28a(+)载体后进行序列测定和分析.结果表明,fba基因全长873 bp,编码290个氨基酸.将构建的重组表达质粒pET28a-fba转化至大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下成功获得表达融合蛋白rMGfba,大小约为33 ku.纯化蛋白并对蛋白进行酶活性检测,结果显示该酶在体外具有与阳性对照醛缩酶相同的催化功能.用该蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,提取鸡毒支原体膜蛋白,Western-blot分析结果显示FBA多抗可与疏水性膜蛋白特异性结合,说明FBA位于鸡毒支原体膜表面.

关键词：鸡毒支原体、醛缩酶、原核表达、酶活性、膜定位

所属期刊栏目：43

分类号：S852.62(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目30871883;公益性行业农业科研专项201003012

在线出版日期：2013-03-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：42-46