非洲猪瘟病毒NP419L基因shRNA表达质粒的构建与筛选

摘要：

为构建非洲猪瘟病毒(ASFV) shRNA表达质粒,以PCR扩增出非洲猪瘟病毒NP419L基因,并插入真核表达载体pEGFP-N1中,构建重组真核表达质粒pNP419L-GFP,将其转染NIH-3T3细胞,NP419L-GFP融合基因在细胞中获得表达.针对NP419L基因设计并合成5对干扰序列,将其连接到RNAi表达载体pSuper中,构建干扰质粒pSuper-shNP419L-A,B,C,D,E,将质粒pNP419L-GFP和pSu-per-shNP419L-A,B,C,D,E分别共转染NIH-3T3细胞,通过荧光显微镜观察和流式细胞仪分析干扰效率.结果显示,5个干扰质粒均能抑制NIH-3T3细胞中NP419L-GFP融合基因的表达,其中pSuper-shNP419L-A,B的抑制效果较好,在87％以上,与pSuper-shNP419L-C,D,E之间均存在显著性差异(P＜0.05).表明,本试验成功构建出针对ASFV NP419L基因的RNA干扰质粒,并筛选出了有效沉默NP419L基因的干扰序列,为进一步体内试验研究奠定了基础.

关键词：非洲猪瘟病毒、NP419L基因、RNA干扰、筛选

所属期刊栏目：43

分类号：S852.659.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目31001052;教育部"长江学者和创新团队发展计划"创新团队项目IRT0978;江苏省优势学科建设工程资助项目2010

在线出版日期：2013-03-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：9-14