空肠弯曲菌NCTC11168基因组表达文库的构建及鉴定

摘要：

将空肠弯曲菌NCTC11168基因组用Sau3AⅠ部分酶切,回收400～3 000bp的片段。用BamHⅠ酶切原核表达载体pET30a（b,c）,用SAP去磷酸化后,切胶回收线性载体片段。将基因组片段与载体按摩尔比例10∶1连接,转化DH5α感受态细胞,PCR分析插入片段大小的分布和插入的正确率。从转化的平板上提取质粒,转化表达宿主菌BL21（DE3）,获得基因组表达文库。用IPTG诱导BL21（DE3）,SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况。提取基因组,以0.5U/μg Sau3AⅠ于37℃部分酶切基因组,回收400～3 000bp片段。载体用2.5U/μg BamHⅠ线性化后,用0.8U/μg SAP将其完全去磷酸化。基因组片段与载体连接转化DH5α感受态细胞,获得了基因组表达文库,库容达52 700个克隆,可以覆盖弯曲菌全基因组4次以上,片段插入正确率为83.3%～91.7%,片段大小为400～3 000bp,且均匀分布,IPTG诱导表达文库后蛋白呈现高效表达,表明成功构建了空肠弯曲菌的基因组表达文库。

关键词：空肠弯曲菌、基因组表达文库、毒力因子

所属期刊栏目：41

分类号：S852.613;Q786(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;国家科技支撑计划;长江学者和创新团队发展计划创新团队项目

在线出版日期：2012-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1106-1110