牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

摘要：

采用PCR方法从牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)Bartha Nu/67株扩增出完整的gB基因编码区,将其克隆到pGEM-T Easy载体.根据抗原性将gB基因分成3段,分别克隆到原核表达载体pET-32a中,构建了重组质粒,将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析.结果显示,目的蛋白均获得了高效表达,均以包涵体形式存在,纯化后目的蛋白的纯度在90%以上.Western-blot和ELISA分析表明,重组蛋白pET-gBⅢ的反应原性最好.以纯化的pET-gBⅢ为诊断抗原包被酶标板,建立了检测BHV-1抗体的间接ELISA方法.用该间接ELISA与法国IDEXX公司的IBR抗体检测试剂盒对临床样品进行平行检测,结果二者的总符合率为93.8%.表明建立的gBⅢ ELISA检测方法具有很好的特异性和敏感性.

关键词：牛疱疹病毒Ⅰ型、gB基因、原核表达、间接ELISA

所属期刊栏目：40

分类号：S852.659.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：东营职业学院院级项目2009DYZY03

在线出版日期：2011-03-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1259-1264