牛共刺激分子CD80和CD86实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

摘要：

根据GenBank中牛CD80和CD86基因的序列,在保守区设计并合成各自的特异引物,并以牛3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,采用SYBR Green Ⅰ染料以建立一种检测牛共刺激分子CD80和CD86的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法.将CD80基因扣CD86基因克隆至pMD18-T载体上,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验.结果表明,CD80基因、CD86基因和GAPDH基因的C1值与标准品稀释度在1×102～1×108 copies/μL范围均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991.熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,特异性和重复性较好.证实,所建立的牛共刺激分子CD80和CD86荧光定量RT-PCR检测方法适用于临床样品的检测.

关键词：SYBR Green Ⅰ、实时荧光定量聚合酶链反应、牛、CD80、CD86

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分类号：S852.42(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点基础研究发展计划（973计划）;国家自然科学基金;兵团博士基金

在线出版日期：2010-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：953-958