副猪嗜血杆菌Neu基因的克隆表达及表达产物的免疫原性
为研究副猪嗜血杆菌(HPS)基因工程疫苗,以HPS 5型毒株为模板,通过PCR扩增获得副猪嗜血杆菌神经氨酸酶(Neu)全基因,将其克隆至pMD18-T载体并对其进行测定和分析.结果表明,Neu全基因含一个2187 bp的开放阅读框,编码一含729个氨基酸的蛋白,与Neu基因参考序列(登录号:NZABKM01000006)的同源性为99.0%.以pMD-Neu基因为模板,重新设计引物,扩增得到HPS Neu蛋白的部分编码区,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建得到重组原核表达质粒pET-Neu.将pETNeu在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行优化表达,经SDS-PAGE分析,重组蛋白Neu主要以包涵体形式表达,分子质量为52 ku;Western-blot分析表明,重组蛋白Neu能与阳性血清发生特异性抗原反应.将纯化重组蛋白Neu试验性注射免疫昆明小鼠,攻毒试验结果显示,氢氧化铝佐剂组的保护性较低,仅有10%;而弗氏佐剂组具有较高的保护性,保护率高达60%.
副猪嗜血杆菌、神经氨酸酶、原核表达、免疫原性
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S852.612;Q786(动物医学（兽医学）)
国家科技支撑计划项目2006BAD06A00;长沙市科技计划重大专项K0902007-21
2010-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
822-826
