H3亚型猪流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达及其间接ELISA检测方法的建立

摘要：

根据GenBank上登录的H3亚型猪流感病毒HA基因序列设计了1对引物,经PCR扩增出HA基因目的片段,并将其克隆到pFastBacGP67C杆状病毒载体上,筛选阳性重组转座载体pFastBacGP67C-H3,转化至含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞,构建杆状病毒表达载体,获得重组转座子rBacmid-H3,在脂质体介导下转染处于对数生长期的sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBv-H3,将其感染sf9昆虫细胞,收获目的蛋白.经血凝试验、SDS-PAGE、Western-blot、免疫组织化学分析,结果表明,HA蛋白得到表达,且具有良好的免疫学活性.用表达的HA蛋白作为包被抗原,初步建立了H3亚型猪流感病毒的间接ELISA检测方法,通过对93份送检的疑似猪流感血清进行检测,结果显示,检出阳性率为46.24%.上述结果为建立快速、准确、简便的H3亚型猪流感鉴别诊断试剂盒奠定了基础.

关键词：H3亚型猪流感病毒、血凝素基因、昆虫细胞杆状病毒表达系统、间接酶联免疫吸附试验

所属期刊栏目：40

分类号：S852.659.5(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家科技支撑计划;黑龙江省自然科学基金

在线出版日期：2010-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：252-257