猪轮状病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立
根据GenBank中登录的A群猪轮状病毒(PoRV)代表株OSU毒株序列,针对VP7基因设计了1对特异性引物,将150 bp目的片段与pMD18-T载体连接构建标准品,建立了检测A群PoRV的SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法,并对该方法的敏感性、特异性和重复性进行了评价.结果显示,该方法在1.3×10~8 copies/μL～1.3×10~2 copies/μL范围内线性关系良好,相关系数为0.999;最低检测限为1.3×10~1copies/μL;用该方法检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪病毒性腹泻病毒均为阴性;批内及批间变异系数均低于2%.表明,该方法敏感性高、特异性强、重复性好.用该方法抽检58份疑似病例的腹泻病料,结果检出53份阳性,同时用普通RT-PCR和快速检测试剂盒对这些病料进行检测,结果分别检出42份和32份阳性.用这3种方法对11例已知阳性的临床粪便样品进行检测,结果建立的检测方法与其他两种方法的符合率为100%.用该方法检测PoRV细胞培养物中的病毒载量为1.0×10~5copies/μL.结果表明,建立的检测方法为PoRV的早期诊断、分子流行病学调查以及疫苗质量的监测等提供了新的快速检测技术.
猪轮状病毒、SYBR Green Ⅰ、实时荧光定量PCR
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S852.659.4(动物医学（兽医学）)
国家”十一五”科技支撑计划项目2006BAD06A07
2010-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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