副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的原核表达及其表达产物的免疫原性
根据GenBank中登录的副猪嗜血杆菌(HPS)D15基因鸟枪序列(登录号:NZ_ABKM01000005)设计1对特异性引物,以HPS 5型SP毒株DNA为模板,通过PCR方法扩增了D15基因.将其进行T-A克隆,构建pMD18D15质粒并进行序列测定和分析.结果表明,D15基因含有一个2 418 bp的开放阅读框,编码805个氨基酸,与D15基因参考序列的同源性为99.9%.该HPS D15基因的推导氨基酸序列具有典型Omp85蛋白家族的拓扑结构特征.以pMD18D15质粒为模板,用PCR方法扩增HPS D15基因,并将其克隆到pET-28a(+)中,构建pETD15原核表达质粒,将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)后,用IPTG诱导重组菌,并用SDS-PAGE和Western-blot检测诱导物.结果表明,pETD15重组表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白的分子质量约为94 ku,融合蛋白能被HPS阳性血清识别,提示该融合蛋白具有反应原性.昆明小鼠和豚鼠免疫试验结果表明,D15重组蛋白具有一定的诱导免疫保护反应的能力.
副猪嗜血杆菌、外膜蛋白、原核表达、免疫原性
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S852.612(动物医学（兽医学）)
湖南省科技重大专项;湖南农业大学人才引进项目
2010-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
158-163
