绵羊PRNP等位基因PCR-SSCP分析条件的优化

摘要：

为进行绵羊PRNP等位基因密码子136、154、171的多态性研究,建立适合于绵羊PRNP等位基因开放阅读框(ORF)内高变区PCR-SSCP分析方法,对凝胶浓度、交联度、甘油浓度、电泳电压、电泳时间、PCR产物与变性缓冲液比例、电泳缓冲液浓度、上样量等影响因素进行了优化试验.在优化中引入了正交试验法,以使优化过程简化,结果可靠.结果表明,交联度49:1、甘油浓度0%、凝胶浓度12%、电泳电压200 V、PCR产物上样量≥2.0μL且<4.0μL、PCR产物与变性缓冲液比例1:4、0.5×TBE缓冲液及4℃电泳45 h为最佳试验条件,据此建立了绵羊PRNP等位基因136、154、171密码子的PCR-SSCP分析方法.

关键词：绵羊、PRNP等位基因、聚合酶链式反应-单链构象多态性、正交试验、分析条件优化

所属期刊栏目：38

分类号：S852.659.7(动物医学（兽医学）)

资助基金：高等学校博士学科点专项科研基金项目20060733006;甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目GNSW-2005-11及GNSW-2007-04;家畜疫病病原生物学国家重点实验室基金项目2008-2009

在线出版日期：2008-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：721-727