猪肺炎霉形体热休克蛋白Hsp70单克隆抗体的制备及鉴定

摘要：

以肺炎霉体体(Mhp)Yin-1株为模板,利用所合成的引物扩增了伴侣蛋白DnaK(热休克蛋白Hsp70)C末端基因,将得到的目的片段分别克隆至表达载体pET-28a和pGEX-6P-1中,原核表达获得了重组蛋白6P-1-DnakC和28a-DnakC,经Western-blot分析,均能被Mhp抗血清识别.以28a-DnakC作为包被抗原,建立了间接ELISA检测方法,以6P-1-DnakC为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠.筛选和鉴定了2株分泌抗DnaK的杂交瘤细胞株,命名为1AD10、2AF11.Western-blotting结果表明,这2株单抗与Mhp发生特异性反应而不与其他相关霉形体发生反应.抗体亚类鉴定结果显示,1AD10、2AF111分别为IgG2b和IgG2a亚类,且轻链均为κ链.相加ELISA试验表明,2株单抗能识别不同的抗原表位.

关键词：猪肺炎霉形体、伴侣蛋白DnaK、热休克蛋白70、单克隆抗体

所属期刊栏目：38

分类号：S852.62;Q813.2(动物医学（兽医学）)

资助基金：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所所长基金项目2007

在线出版日期：2008-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：701-706