毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建

摘要：

为构建毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA表达文库,用Trizol试剂提取毒害艾美球虫孢子化卵囊总RNA,采用SMART技术,在逆转录酶的作用下将总RNA反转录成第一链cDNA,经LD-PCR扩增合成双链cDNA(ds cDNA).经蛋白酶K消化、Sfi I酶切,过CHROMA SPIN-400TM柱去除小于400 bp的片段,与?TriplEx2TM噬菌体载体连接,用Gigapack ⅢGoldTM载体蛋白包装,构建了cDNA噬菌体表达文库.经测定,原始文库容量为4.72×106pfu/mL,扩增后的文库容量为2.62×1010pfu/mL,重组率为97.5%,插入片段为500～1100 bp.证实,该文库质量良好,为毒害艾美球虫新基因的筛选、克隆及功能研究奠定了基础.

关键词：鸡、球虫、毒害艾美球虫、孢子化卵囊、cDNA文库、SMART技术

所属期刊栏目：38

分类号：S852.723;Q81(动物医学（兽医学）)

资助基金：科技部科技基础条件平台建设计划2005DKA21205-4;国家高技术研究发展计划863计划2006AA10A207-1

在线出版日期：2008-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：196-199