禽呼肠孤病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

摘要：

为建立禽呼肠孤病毒(ARV)实时荧光定量RT-PCR检测方法,将PCR扩增的σC基因片段克隆到pGM-T载体,重组质粒经筛选、鉴定、Sal I单酶切,得到线性化转录模板DNA,将体外转录的RNA梯度稀释后作为阳性模板,用于标准曲线的制定.根据S1基因σC结构蛋白基因保守区域序列设计了1对特异性引物,以体外转录的RNA作为标准品,应用SYBR Green Ⅰ染料法建立了检测ARV的一步法实时荧光定量RT-PCR方法.特异性、敏感性和重复性试验结果表明,制作的标准曲线定量浓度范围宽,比常规的RT-PCR敏感1×103倍,可检测到5.2×102个拷贝的标准品RNA,与NDV、IBDV、MG均不反应;从攻毒鸡的关节组织中可以检测到病毒,病毒含量为1×105～1×107个拷贝/μL.表明,建立的实时荧光定量RT-PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于ARV的检测.

关键词：禽呼肠孤病毒、体外转录、SYBR Green Ⅰ、荧光定量RT-PCR

所属期刊栏目：37

分类号：S852.659.4;Q503(动物医学（兽医学）)

资助基金：广西留学回国人员科学基金桂科回0639016;广西自然科学基金桂科自0542034

在线出版日期：2007-11-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：767-771