7种动物冠状病毒基因芯片同步检测的研究

摘要：

根据发布的7种动物冠状病毒相关基因的序列,给每种病毒设计了4～17对引物,同时依据RNA聚合酶基因序列合成了l对兼并引物,利用TCV原毒和纯化浓缩的CCV、FCV、FIPV、TGEV、PRCV、BCV细胞毒,构建了89个基因片段的克隆.采用煮沸裂解法制备质粒DNA,进行特异引物PCR扩增,回收纯化产物,点制冠状病毒基因芯片.抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,同时对BCV、CCV利用Cy3-dCTP随机渗入反转录标记,与芯片进行杂交检测.结果显示,BCV和TCV基因克隆间未见交叉,CCV、FCV、FIPV、TGEV、PRCV则存在广泛交叉.选择无交叉的特异克隆片段点制最终基因芯片,并与病毒多重PCR扩增产物杂交,芯片信号未见交叉,结果判断明确.表明,基因芯片检测法比传统PCR法敏感1000倍.

关键词：冠状病毒、基因芯片、杂交、检测

所属期刊栏目：37

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2003AA222060

在线出版日期：2007-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：557-562