猪IFN-γ mRNA竞争性RT-PCR定量检测方法的建立

摘要：

无菌分离的猪外周血单个核细胞(PBMC),经ConA体外刺激培养15 h后提取细胞总RNA.以此总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增到了435 bp的IFN-γ基因.把扩增到的IFN-γ基因与pMD18-T载体连接,构建了pMD-IFN435重组质粒.用另一对引物对重组质粒pMD-IFN435内部进行PCR扩增,得到了257 bp(含PstⅠ酶切位点)的基因片段,将此基因片段连接到pMD18-T载体上构建了pMD-IFN257重组质粒.将pMD-IFN257双酶切(PstⅠ+SalⅠ)后回收的目的片段与pMD-IFN435双酶切(PstⅠ+SalⅠ)后回收的目的片段连接,得到了含有367bp目的片段的重组质粒pMD-IFN367,即内标准DNA模板.以定量后的pMD-IFN367与2倍梯度稀释的pMD-IFN435进行竞争PCR扩增,建立了能够准确、方便定量检测猪IFN-γmRNA的标准竞争曲线的线性回归方程(y=0.414x-1.864).

关键词：猪、IFN-γ基因、定量检测、RT-PCR

所属期刊栏目：36

分类号：S852.42(动物医学（兽医学）)

在线出版日期：2007-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1000-1004