猪IL-18基因的原核表达及重组蛋白的纯化

摘要：

以pcDNA3.1-pIL-18为模板,采用PCR技术扩增到了猪白细胞介素18(IL-18)的成熟蛋白基因,通过Kpn Ⅰ+SacⅠ双酶切及连接反应,构建了pET32c-pIL-18原核表达质粒.经过限制性内切酶分析、PCR鉴定及DNA序列测定证实,重组质粒中的基因片段连接正确.之后,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),于37℃、1.0 mmol/L IPTG条件下诱导表达.菌体裂解产物经SDS-PAGE分析,在分子质量约为33 ku处出现了预期的目的蛋白.用8 mol/L脲对表达产物变性,经Ni2+-NTA柱纯化,透析复性,得到了纯化的IL-18蛋白.Western-blot分析证实,纯化的重组IL-18蛋白具有反应活性.上述研究结果为重组IL-18的应用奠定了基础.

关键词：猪白细胞介素-18基因、原核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：36

分类号：S852.42;Q785(动物医学（兽医学）)

在线出版日期：2006-11-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：842-846