口蹄疫病毒RNA聚合酶3D基因在毕赤酵母中的表达

摘要：

以口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)RNA聚合酶基因3D为研究对象,对其部分碱基进行定点诱变,替换成在毕赤酵母(Pichia pastoris)中使用频率较高的密码子以优化其表达.改造后的目的片段用NotⅠ和AvrⅡ内切酶双酶切,然后与相应内切酶双酶切的穿梭载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K/3D,转化大肠埃希氏菌JM109,筛选阳性克隆pPIC9K/3D.经测序表明,插入位置、突变碱基、片段大小和读码框均正确.重组质粒用SacⅠ内切酶线化,电转化毕赤酵母SMD1168,采用G418抗性梯度法筛选,获得高拷贝整合重组菌株SMD1168/pPIC9K/3DHIS+MUT+,利用甲醇进行诱导分泌表达,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定,3D基因在毕赤酵母中表达成功,目的蛋白分子质量大小为52 ku,与预期的大小吻合,并能够被FMDV阳性血清所识别,表达量占总分泌蛋白量的36%.

关键词：FMDV、3D基因、基因克隆、毕赤酵母表达系统

所属期刊栏目：34

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划G199011901

在线出版日期：2004-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：8-11