永生化绵羊肺成纤维细胞系的构建及鉴定
为了利用携带人源端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的慢病毒表达系统将原代绵羊肺成纤维细胞进行永生化.本研究利用PCR技术从pBabe-neo-hTERT中扩增hTERT基因,并利用infusion技术构建重组慢病毒表达载体pLOV-puro-hTERT.将重组慢病毒三质粒系统共转染293T细胞,拯救出慢病毒颗粒并感染原代绵羊肺成纤维细胞,经嘌呤霉素抗性筛选获得阳性克隆,分别应用RT-PCR和Western blot方法检测传代细胞系中hTERT基因的转录和表达水平.筛选获得的阳性克隆,命名为SLT细胞系.SLT细胞系连续传代后RT-PCR及Western blot 检测均显示hTERT稳定表达.本研究表明,我们成功构建了永生化绵羊肺成纤维细胞系.
绵羊肺成纤维细胞、人端粒酶逆转录酶、永生化
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S852.659.3(动物医学（兽医学）)
国家重点研发计划项目2016YFD0500108;国家自然科学基金项目31502068;上海市科技兴农重点攻关项目2016043;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项2016JB01、2017JB06
2018-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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