奶牛隐孢子虫Nested PCR-RFLP方法的建立及初步应用

摘要：

为快速检测并准确鉴别奶牛隐孢子虫种,以隐孢子虫18SrRNA基因的特殊区域为基础,设计内、外引物,并根据软件分析确定相应的内切酶EcoT14I,采用Nested PCR-RFLP方法进行虫种种型鉴别分析.在NestedPCR两次PCR反应中,以微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,C.p)和安氏隐孢子虫(Cryptosporidiumandersoni,C.an)卵囊提取的DNA为模板,均能扩增出长约800 bp和500 bp的明亮条带,且特异性强,其他虫种不能扩增出条带,该方法最低可检测到5个卵囊/g粪便;对于由内引物扩增出的500 bp的条带,C.an的PCR产物能被内切酶EcoT141酶切,酶切后的片段分别为416 bp和92 bp,C.p的PCR产物不能被此酶酶切.用所建立的Nested PCR-RFLP法对上海奶牛389头和进口奶牛200头的共计589份粪样进行检测,Nested PCR的结果表明上海奶牛和进口奶牛的隐孢子虫阳性率分别为19.02%和3.5%,RFLP的结果表明上海奶牛感染的主要是C.p和C.an,进口奶牛感染的主要是C.p.研究结果表明,本研究建立的检测奶牛粪便中的隐孢子虫的Nested PCR-RFLP法,可用于奶牛隐孢子虫流行病学调查并有效鉴别奶牛隐孢子虫种.

关键词：奶牛、隐孢子虫、巢式PCR-RFLP

所属期刊栏目：17

分类号：S858.232.723(动物医学（兽医学）)

资助基金：上海市科技兴农重点攻关课题农科攻字2005第324号

在线出版日期：2010-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：65-72