miR-499 rs3746444多态性抑制宫颈癌细胞的增殖作用及分子机制

摘要：

目的 探讨miR-499 rs3746444多态性与宫颈癌临床特征相关性及对宫颈癌细胞增殖的影响作用与机制.方法 应用病例对照研究方法,选取2012年6月至2018年12月于内蒙古自治区人民医院就诊的宫颈癌病人857例作为实验组,同期873例健康志愿者作为对照组,两组年龄均在23～62岁,采用TaqMan探针法对rs3746444位点的多态性进行基因分型;构建包含pGL3-Sox63'UTR和miR-499的GG或AA的海肾荧光素酶载体(Renilla luciferase vector)于prl-sV40质粒中,并采用lipo2000转染人宫颈上皮永生化细胞H8和人宫颈癌细胞系:腺癌样SiHa、上皮样HeLa和C33A,CCK-8法检测细胞增殖;双荧光素报告基因检测法分析Frefly和Renilla荧光素酶活性;Western blot检测Hela和SiHa细胞Cyclin D1、CyclinE、CDK4、CDK6和Sox6蛋白表达.结果 AG和GG基因型宫颈癌发生风险分别是AA基因型个体的1.09倍和2.41倍,携带G等位基因的个体患宫颈癌的风险是AA基因型个体的1.28倍,GG基因型宫颈癌患者ⅡI期及以上的比例显著高于AA基因型.GG表型肿瘤高度分化比例明显高于AA表型组,rs3746444不同基因型对正常宫颈H8细胞的增殖无显著影响.miR-499 GG+Sox6-3'UTR处理组Hela、C33A和SiHa细胞72 h时OD450显著低于miR-499 AA+Sox6-3'UTR组,且高于Sox6-3'UTR组(P<0.05).miR-499 GG+Sox6-3'UTR处理组Hela和SiHa细胞Cyclin D1、CyclinE、CDK4和CDK6显著高于miR-499 AA+Sox6-3'UTR组,低于Sox6-3'UTR组(P<0.05).与miR-499 AA+Sox6-3'UTR处理组相比,miR-499 GG+Sox6-3'UTR处理组Sox6的表达水平增加(P<0.05),且均低于Sox6-3'UTR对照组(P<0.05).结论 miR-499的rs3746444突变(A>G)与宫颈癌肿瘤生长和分化程度密切相关,其通过上调Sox6介导的CyclinD1高表达具有明显的促进宫颈癌细胞生长增殖作用.

关键词：微小RNA-499、Sox6、宫颈癌、细胞周期、细胞增殖

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资助基金：湖北省卫生计生委重点支撑项目WJ2017Z002

在线出版日期：2021-03-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：143-149