花椒多糖抗阿尔茨海默病作用及其糖谱法结构特征分析

摘要：

目的:建立阿尔茨海默病(AD)小鼠模型,评价花椒多糖对AD的治疗作用并采用糖谱法分析其结构特征.方法:采用腹腔注射D-半乳糖联合灌胃三氯化铝建立快速衰老的AD小鼠模型,通过Morris水迷宫实验评价小鼠的学习记忆能力,苏木素-伊红(HE)染色和尼氏染色观察小鼠脑组织病理学状况和神经元损伤情况.对花椒多糖进行酸水解和不同糖苷酶酶解后,采用高效薄层色谱法(HPTLC)和荧光辅助凝胶电泳法(PACE)分析水解产物的结构特征.HPTLC色谱条件为采用硅胶60高效薄层色谱板,点样量5 μL,展开剂乙酸乙酯-冰乙酸-水(2∶2∶1),展开2次,苯胺-二苯胺-磷酸溶液显色,在105℃加热10 min后日光下检视.PACE检测条件为34％分离胶和8％浓缩胶,电泳缓冲液为0.1mol·L-1三羟甲基氨基甲烷(Tris)-硼酸缓冲液(pH 8.2),电泳在0℃环境下进行,上样量3～6 μL,用15 mA恒流跑至样品达凝胶前端,紫外灯365 nm下检视.结果:Morris水迷宫实验结果表明,花椒多糖明显改善了 AD模型小鼠的学习和记忆能力,逃避潜伏期缩短,穿梭平台次数和目标象限停留时间明显增加.组织病理学实验结果表明,花椒多糖能改善AD小鼠海马组织CA1、CA3区的病理情况和神经元的损伤,且尼氏小体数量明显增加.糖谱法分析结果表明,HPTLC和PACE分析结果基本一致,花椒多糖主要能被纤维素酶和果胶酶催化酶解成小分子糖类,表明其主要含有β-1,4-葡萄糖苷键和α-1,4-半乳糖醛酸苷键,能被葡聚糖酶、β-半乳糖苷酶和β-甘露糖酶少量酶解,表明其含有少量α-1,6-葡萄糖苷键、β-吡喃半乳糖苷键和β-1,4-甘露糖苷键.结论:花椒多糖对AD小鼠有明显治疗作用,其结构中主要含有β-1,4-葡萄糖苷键和α-1,4-半乳糖醛酸苷键,可为中药多糖的结构解析提供有益借鉴.

关键词：花椒多糖、阿尔茨海默病(AD)、糖谱法、糖苷酶、高效薄层色谱法(HPTLC)、荧光辅助凝胶电泳法(PACE)

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分类号：R22;R28;R96;O657(中医基础理论)

资助基金：山西中医药大学科技创新能力培育计划;国家自然科学基金;山西省科技厅基础研究计划项目;山西省高等学校科技创新项目;山西中医药大学博士科研启动基金项目;山西中医药大学优秀博士毕业生来晋工作奖励经费科研启动基金项目

在线出版日期：2023-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：174-182