丹皮酚减轻SIRT6/PARP1介导的DNA损伤抑制血管平滑肌细胞衰老的作用

摘要：

目的:探讨丹皮酚(Pae)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)衰老的作用及对沉默调节信息因子6(SIRT6)/腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARPl)信号通路的影响.方法:建立AngⅡ(100nmol·L-1)诱导的VSMCs应激性衰老模型,实验分为正常组、模型组、Pae低、中、高(30、60、120μmol·L-1)浓度组.采用β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色法检测细胞衰老阳性率;细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞增殖能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SIRT6、PARP1、衰老相关基因p16、p21、p53、增殖细胞核抗原(PCNA)、脱氧核糖核酸(DNA)损伤蛋白磷酸化的组蛋白H2AX(即p-H2AX或γ-H2AX)的表达并采用EdU染色法检测VSMCs增殖变化;siRNA-SIRT6转染制备沉默的VSMCs,观察SIRT6沉默的VSMCs中Pae对SIRT6、PARP1及p16、γ-H2AX蛋白的表达.结果:SA-β-Gal染色结果显示,与正常组比较,模型组SA-β-Gal染色衰老阳性率增加(P＜0.01);与模型组比较,Pae给药组均有效降低SA-β-Gal染色阳性率(P＜0.05,P＜0.01).Western blot结果显示,与正常组比较,模型组PCNA、SIRT6、PARP1表达下调、衰老相关蛋白p16、p21、p53、γ-H2AX的表达上调(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,Pae给药干预后,各浓度组促进了 PCNA、SIRT6、PARP1的蛋白表达,抑制了 p16、p21、p53、γ-H2AX的蛋白表达,且呈剂量依赖性(P＜0.05,P＜0.01).EdU染色结果显示,与正常组比较,模型组EdU阳性细胞数减少(P＜0.01);与模型组比较,Pae给药组EdU阳性细胞数明显增加(P＜0.05,P＜0.01).SIRT6沉默后,Pae促进SIRT6、PARP1及抑制p16的作用被逆转(P＜0.05,P＜0.01).此外加入SIRT6抑制剂IN-1可促进AngⅡ诱导细胞衰老的发生(P＜0.05,P＜0.01).结论:Pae能够有效抑制VSMCs的衰老,其机制作用可能与调控SIRT6/PARP1信号通路相关.

关键词：丹皮酚、沉默调节信息因子6(SIRT6)、腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)、血管平滑肌细胞(VSMCs)、衰老

所属期刊栏目：29

分类号：R2-0;R22;R285.5;R289;R33

资助基金：国家自然科学基金;安徽省自然科学基金

在线出版日期：2023-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：83-92