10.13422/j.cnki.syfjx.202202322
启膈散乙酸乙酯部位提取物通过抑制TGF-β1信号通路干预食管癌细胞的迁移和侵袭
目的:探讨启膈散(QGS)对食管癌细胞TE-1迁移和侵袭能力的影响机制.方法:利用基因芯片技术筛选正常组和启膈散组差异表达基因,分析差异基因的本体功能和信号通路.噻唑蓝(MTT)比色法检测QGS对TE-1细胞活性的影响.后续验证实验分为空白组、转化生长因子-β1(TGF-β1)组、TGF-β1+QGS组、TGF-β1+SB431542组.显微镜观察各实验组细胞形态,细胞划痕实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组细胞E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、波形纤维蛋白(Vimentin)、果蝇母本抗生存因子2(Smad2)和果蝇母本抗生存因子7(Smad7)mRNA的表达水平.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞E-Cadherin、Vimentin、p-Smad2/3、Smad2/3和Smad7蛋白的表达.结果:QGS组与空白组之间有1 487个差异基因,其中1 080个下调,407个上调,下调基因占差异基因的72.63％.下调基因涉及的主要生物学过程有细胞骨架蛋白结合、ATP结合、腺苷酸核苷酸结合、腺苷酸核糖核苷酸结合等,涉及的京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路主要包括TGF-β信号通路、细胞周期、细胞外基质-受体相互作用蛋白、肿瘤中的通路、卵母细胞减数分裂等;上调基因主要参与RNA结合、DNA结合、转录调节子活性、转录激活子活性、核苷酸结合等生物学过程,涉及的KEGG通路主要包括丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、膀胱癌、肾细胞癌、癌中通路、p53信号通路等.与空白组比较,QGS(20、30、40、60、80 mg·L-1)干预TE-1细胞12、24、36、48、60h后,细胞活性抑制率明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05),抑制率呈时间和浓度依赖性.与空白组比较,TGF-β1组细胞变长,呈成纤维细胞表型.与TGF-β1组细胞比较,TGF-β1+QGS组细胞变短,形态恢复正常,呈上皮细胞表型;TGF-β1+SB431542组细胞形态与TGF-β1+QGS组相似.与空白组比较,TGF-β1组细胞的迁移和侵袭能力增强,差异有统计学意义(P＜0.05).与TGF-β1组比较,TGF-β1+QGS组和TGF-β1+SB431542组细胞迁移和侵袭能力受到抑制而减弱,差异有统计学意义(P＜0.05).但TGF-β1+QGS组和TGF-β1+SB431542组之间的迁移和侵袭能力差异无统计学意义.与空白组比较,TGF-β1组Vimentin和Smad2 mRNA的表达水平升高(P＜0.05),E-Cadherin和Smad7 mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与TGF-β1组比较,TGF-β1+QGS组和TGF-β1+SB431542组的Vimentin和Smad2 mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05),E-Cadherin和Smad7 mRNA的表达水平升高(P＜0.05).与空白组比较,TGF-β1组Vimentin、p-Smad2/3和Smad2/3的蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05),E-Cadherin和Smad7蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与TGF-β1组比较,TGF-β1+QGS组和TGF-β1+SB431542组的Vimentin、p-Smad2/3和Smad2/3蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05),E-Cadherin和Smad7蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:QGS乙酸乙酯提取物通过TGF-β1途径抑制TE-1细胞的上皮-间质转化过程,减少TE-1细胞的迁移和侵袭.
食管癌、上皮间充质转化、迁移、侵袭、启膈散、转化生长因子-β1(TGF-β1)信号通路
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R22;R242;R2-031;R735.1(中医基础理论)
国家自然科学基金;国家自然科学基金
2023-04-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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