黄芩汤通过Nrf2信号通路对Caco-2细胞抗氧化应激作用的机制

摘要：

目的:以Caco-2细胞为载体,结合基因干扰(RNAi)技术,通过体外实验进一步验证黄芩汤基于核因子E,相关因子2(Nrf2)通路发挥的抗氧化应激作用.方法:将处于对数生长期的Caco-2细胞,经siRNA转染,构建siRNACaco-2细胞;将正常Caco-2细胞和siRNA Caco-2细胞与不同浓度的黄芩汤共同孵育后,提取RNA和蛋白,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)技术检测血红素氧合酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、谷胱甘肽疏基转移酶(GST)、接头蛋白Kelch样ECH相关蛋白l(Keap1)及Nrf2 mRNA和蛋白的表达;同时,采用比色法和探针法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力及丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的表达水平.结果:与空白组比较,仅有黄芩汤400 mg·L-1组与萝卜硫素(SFN)组可降低正常Caco-2细胞内ROS、MDA含量(P＜0.01);而黄芩汤各剂量组与SFN组细胞内SOD与GSH-Px活力均有增加的趋势,且黄芩汤400 mg·L-1组和SFN组与空白组比较差异有显著统计学意义(P＜0.01);同时,各组细胞HO-1、GST、Keap1、NQO1和Nrf2蛋白及mRNA的表达量均有明显升高的趋势(P＜0.05,P＜0.01).经转染后,与空白组比较,模型组细胞内MDA和ROS的含量升高,而GSH-Px和SOD的活力及HO-1、GST、Keap1和NQO1蛋白及mRNA的表达量均有不同程度地降低(P＜0.05,P＜0.01),与药物孵育后,与模型组比较,SFN组细胞内SOD活力和SFN组、黄芩汤各给药组GSH-Px活力显著升高(P＜0.01),黄芩汤400 mg·L-1组、200 mg·L-1组和SFN组细胞内SOD和GSH-Px活力均有升高的趋势(P＜0.01),黄芩汤400 mg·L-1组和SFN组MDA有降低的趋势,且各给药组ROS均有降低(P＜0.01);HO-1、GST、Keap1、NQO1和Nrf2的蛋白及mRNA表达均有不同程度增加(P＜0.05,P＜0.01).结论:黄芩汤可以通过调控Nrf2通路发挥抗氧化应激的作用.

关键词：黄芩汤、氧化应激、Caco-2细胞、RNA干扰、核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路

所属期刊栏目：29

分类号：R2-0;R22;R285.5;R289;R33

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;中国中医科学院中药研究所自主申报项目

在线出版日期：2023-04-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：29-37