基于氧化石墨烯荧光传感技术对中药海马的鉴定

摘要：

目的:建立基于氧化石墨烯荧光传感技术鉴定中药海马的方法,为中药鉴定提供一个新的研究思路.方法:在小海马特异性上游引物Ja-F的5'端标记荧光基团FAM作为核酸探针FAM-单链DNA(ssDNA),在下游引物Ja-R的5'端加上RNA聚合酶Ⅱ的识别位点记为Ja-Rl,用Ja-F/Ja-Rl扩增海马样品,利用体外转录法对扩增产物进行反转录获得小海马ssDNA.取500 nmol·L-1FAM-ssDNA 20 μL,90℃孵育5 min,逐渐冷却至室温,加入不同体积的氧化石墨烯溶液(100 mg·L-1)和三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)缓冲液(pH 7.6,50 mmol·L-1),使反应终体积为1 mL,混匀,室温避光放置不同时间后测荧光强度,筛选制备传感器的最佳氧化石墨烯浓度和反应时间.再加入探针互补序列FAM-ssDNA-match溶液,室温放置不同时间后测荧光值,筛选荧光恢复的最适反应时间并检测传感器可行性.向核酸探针-氧化石墨烯溶液中分别加入ddH2O和不同浓度的小海马ssDNA进行灵敏度检测,最后根据最佳实验条件对市售海马药材进行检测,验证该方法用于中药材基原鉴定的可行性.结果:构建鉴别小海马的核酸探针-氧化石墨烯生物传感器条件为1 mL反应体积中,10nmol·L-1FAM-ssDNA+12mg·L-1氧化石墨烯溶液,室温避光反应20 min,可彻底淬灭探针荧光.传感器可行性检测显示,当向传感器溶液中加入探针互补序列溶液(终浓度90nmol·L-1),室温反应1 h后,体系的荧光信号明显增强.灵敏度检测显示,该方法能够检测到的小海马ssDNA的最低质量浓度约为10mg·L-1.将该方法用于检测市售海马药材,发现只有小海马样品有明显的荧光信号.结论:该实验建立的氧化石墨烯荧光传感技术可用于中药海马的基原鉴定.

关键词：氧化石墨烯荧光传感技术、核酸探针、海马、鉴定、单链DNA(ssDNA)

所属期刊栏目：29

分类号：R284.2;R289;R22;R2-031;R33(中药学)

资助基金：国家自然科学基金81903757

在线出版日期：2023-03-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：185-193