粉红粘帚菌的ATMT体系构建及定殖甘草条件优化

摘要：

目的:建立并优化根癌农杆菌介导的甘草内生真菌粉红粘帚菌的遗传转化体系,优选粉红粘帚菌定殖甘草的条件,为生物菌肥的开发及优质甘草的育种奠定基础.方法:分别从乙酰丁香酮浓度、共培养时间和受体真菌分生孢子浓度3个方面对根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)条件进行优化并优选转化子.采用正交试验,以共培养温度、共培养时间和孢子浓度为考察因素,定殖率为指标,优化粉红粘帚菌定殖甘草的条件.结果:粉红粘帚菌最适转化条件为共培养时间60 h、孢子浓度1×107cfu·mL-1、乙酰丁香酮浓度150μmol·L-1,此条件下的转化效率为每1×107个受体真菌孢子可获得135个转化子.通过标记基因绿色荧光蛋白(GFP)的克隆和p-葡萄糖苷酸酶(GUS)染色结果检测转化的准确性与稳定性.粉红粘帚菌通过浸种法定殖甘草的最佳条件为共培养温度25℃、共培养时间36 h、孢子浓度1×106cfu·mL-1,此条件下定殖率71.11％.结论:本研究成功建立了稳定高效的粉红粘帚菌ATMT体系及其定殖甘草的技术体系,可为甘草生物菌肥的开发奠定基础.

关键词：粉红粘帚菌、根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)、绿色荧光蛋白、β-葡萄糖苷酸酶(GUS)染色、甘草、转化子、正交试验

所属期刊栏目：29

分类号：R22;R931;R28;Q939.1(中医基础理论)

资助基金：国家自然科学基金;北京中医药大学重点攻关项目

在线出版日期：2023-03-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：126-133