南蛇藤提取物通过破坏线粒体结构促进胃癌AGS细胞凋亡的机制

摘要：

目的:观察南蛇藤提取物(COE)对胃癌细胞的抑制作用,探讨COE通过影响线粒体结构和功能促进胃癌凋亡的一种全新的作用机制,为南蛇藤的进一步开发和临床应用提供实验依据.方法:5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)染色联合流式细胞实验用来检测不同质量浓度COE(20、40、80 mg·L-1)对胃癌细胞增殖的影响.通过膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(AnnexinV-FITC)染色实验联合流式细胞术检测COE对胃癌细胞凋亡的影响,用JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测线粒体膜电位的变化,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测COE对胃癌细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-xL(Bcl-xL)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响,用透射电镜检测COE处理后的胃癌细胞线粒体微观结构的变化,包括线粒体膜完整性和内部嵴的变化.COE处理后,Western blot检测胃癌细胞线粒体标志蛋白超氧化物歧化酶1(SODl)、电压依赖性阴离子通道蛋白(VDAC)、抗增殖蛋白1(PHB1)和热休克蛋白60(HSP60)水平的变化.结果:Brdu染色显示,与空白组比较,COE组(40、80 mg·L-1)胃癌细胞的增殖比例明显下降(P＜0.05).AnniexinV-FITC染色显示,与空白组比较,COE组(40、80 mg·L-1)胃癌细胞的凋亡数量明显增加(P＜0.05).JC-l线粒体膜电位检测显示,COE处理后组胃癌细胞的线粒体膜电位水平明显降低.Western blot结果显示,与空白组比较,COE组(20、40、80 mg·L-1)促进胃癌凋亡的相关蛋白Bax和Caspase-3表达明显增加(P＜0.05,P＜0.01),COE组(40、80 mg·L-1)胃癌细胞凋亡抵抗相关蛋白Bcl-2和Bcl-xL表达显著降低(P＜0.01).透射电镜结果显示,与空白组比较,COE组胃癌细胞的微观结构发生了明显变化,细胞膜内出现了很多空泡,线粒体结构出现破坏,线粒体内出现空泡.Western blot结果显示,与空白组比较,COE组(20、40、80 mg-L-1)胃癌细胞中与应激反应有关的蛋白SOD1表达增高(P＜0.05,P＜0.01),COE组(80 mg·L-1)与线粒体稳定和通透性相关的蛋白VDAC、PHB1和HSP60表达均显著下降(P＜0.01).结论:COE能够显著抑制胃癌细胞的增殖,促进胃癌细胞的凋亡,其机制可能与COE破坏胃癌细胞线粒体结构和功能从而激活细胞线粒体凋亡途径有关.

关键词：南蛇藤提取物、线粒体、胃癌、凋亡

所属期刊栏目：28

分类号：R22;R242;R2-031;R285.5(中医基础理论)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;江苏省自然科学基金;江苏省中医药科技发展计划项目;扬州市重点研发计划社会发展项目

在线出版日期：2022-09-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：46-53