基于AMPK/mTOR/ULK1自噬相关通路探讨左归降糖通脉方对AGEs合并缺糖缺氧星形胶质细胞炎性损伤的影响

摘要：

目的:探讨左归降糖通脉方对糖基化终末产物(AGEs)合并缺糖缺氧(OGD)损伤后星形胶质细胞(AS)的影响及干预机制.方法:使用细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)确定AGEs作用浓度及OGD时间,选择左归降糖通脉方(ZGJTTMP)含药血浆的作用浓度;将星形胶质细胞随机分为空白组、模型(AGEs+OGD)组、ZGJTTMP组、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂(Compound C)组、AMPK激动剂(AICAR)组、ZGJTTMP+AICAR组,倒置显微镜下观察各组细胞形态结构,CCK-8法检测各组细胞存活率,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;电镜下观察各组细胞内自噬小体的数目,免疫荧光染色法观察各组细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞LC3、p62、磷酸化(p)-AMPK、AMPK、磷酸化(p)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、mTOR、磷酸化(p)-UNC-51样激酶1(ULK1)、ULK1蛋白的表达情况.结果:选择AGEs 200 mg·L-1合并OGD 6 h作为最适造模条件,5％作为ZGJTTMP含药血浆的最佳作用体积分数.倒置显微镜下见造模后细胞受损严重,ZGJTTMP组与Compound C组细胞损伤得到明显改善;ELISA结果示模型组IL-lβ、IL-6、TNF-α的含量显著增加(P＜0.01),ZGJTTMP组与Compound C组炎症因子含量显著下降(P＜0.01);电镜下可见模型组细胞内自噬小体数目明显增多,免疫荧光结果示LC3荧光表达面积显著增加(P＜0.01),ZGJTTMP组与Compound C组细胞内自噬小体数目明显减少,LC3表达面积显著减少(P＜0.01);Western blot结果显示,与空白组比较,模型组细胞LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著升高(P＜0.01),p62、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK 1显著下降(P＜0.01),与模型组比较,ZGJTTMP组与Compound C组细胞内 LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ、p-AMPK/AMPK 蛋白表达显著下降(P＜0.01),p62、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1 显著升高(P＜0.01).结论:ZGJTTMP对AGEs合并OGD炎性损伤的星形胶质细胞具有保护作用,这一作用是通过抑制了 AMPK/mTOR/ULK1自噬相关通路的激活,从而抑制了自噬的过度表达实现的.

关键词：星形胶质细胞、自噬、左归降糖通脉方、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、UNC-51 样激酶 1(ULK1)

所属期刊栏目：28

分类号：R2-0;R33;R289;R587.1

资助基金：国家自然科学基金;湖南省科技创新团队项目

在线出版日期：2022-08-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：90-99