葫芦素B调控糖酵解抑制HuCCT1细胞增殖的作用机制

摘要：

目的:探究葫芦素B(CuB)抑制细胞增殖和糖酵解的作用机制.方法:采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测CuB(0、40、80、120、160、200、400、800 nmol·L-1)对HuCCT1细胞增殖的影响;采用平板克隆实验检测CuB(50、100、200 nmol·L-1)对HuCCT1细胞集落形成能力的影响;采用流式细胞术检测CuB(50、100、200 nmol·L-1)对HuCCT1细胞周期的影响;采用可见分光光度法检测CuB(50、100、200nmol·L-1)给药后HuCCT1细胞中糖酵解关键酶己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)活性,及葡萄糖消耗量、乳酸生成量和三磷酸腺苷(ATP)生成量的变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CuB对细胞周期相关蛋白、增殖相关蛋白、糖酵解关键蛋白及蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)通路相关蛋白表达情况的影响.结果:与空白组比较,给药24h,160～800nmol·L-1CuB,给药48h后80～800nmol·L-1可以抑制HuCCT1细胞增殖(P＜0.05,P＜0.01),并呈时间和浓度依赖性,给药48 h半数抑制浓度为200 nmol·L-1;CuB可以呈浓度依赖性的抑制HuCCT1细胞集落形成能力(P＜0.01);CuB能够将HuCCT1细胞周期阻滞在G2期(P＜0.05,P＜0.01);CuB(100、200nmo1·L-1)可以抑制糖酵解关键酶HK、PK的活性,并降低细胞葡萄糖消耗量及乳酸和ATP的生成量(P＜0.05,P＜0.01).Western blot结果显示,CuB(100、200 nmol·L-1)可以抑制周期相关蛋白CyclinB1、增殖细胞核抗原(PCNA)、己糖激酶1(HK1)、己糖激酶2(HK2)、丙酮酸激酶1(PKM1)、丙酮酸激酶2(PKM2)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化mTOR(p-mTOR)及磷酸化核糖体蛋白(p-RPS6)的蛋白表达水平(P＜0.05,P＜0.01).结论:CuB可能通过调控Akt/mTOR通路抑制HuCCT1细胞糖酵解进而影响细胞增殖.

关键词：葫芦素B、肝内胆管癌、蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)通路、糖酵解、HuCCT1细胞增殖

所属期刊栏目：28

分类号：R22;R242;R2-031;R285.5(中医基础理论)

资助基金：湖北省教育厅科研重点项目D20202004

在线出版日期：2022-08-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：74-81