大柴胡汤通过调控p38 MAPK/IL-6/STAT3信号通路抑制肝癌的作用机制

摘要：

目的:探讨大柴胡汤抗小鼠肝癌的体内外活性及潜在作用机制.方法:取对数生长期Hepa1-6细胞,培养1、2、4、8 d后,用噻唑蓝(MTT)比色法、结晶紫染色法检测大柴胡汤(0、125、250、500、1 000 mg·L-1)对小鼠肝癌细胞(Hepa1-6)增殖活性的影响.通过肝内注射1x106个Hepa1-6细胞建立小鼠肝癌原位模型,随机分为空白组,模型组,大柴胡汤低、中、高剂量组(0.21、0.625、1.875 g·kg-1),灌胃给药,每日1次;5-氟尿嘧啶(5-FU)组,(25 mg·kg-1)腹腔注射,隔日注射,连续给药14 d后处死小鼠,取肝,用4％多聚甲醛(PFA)固定,苏木素-伊红(HE)染色检测大柴胡汤抑制肝癌的活性.运用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)、Cytoscape3.7.2软件、STRING平台、DAVID平台数据库对大柴胡汤和肝癌靶基因进行关键靶基因的筛选及蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络构建、京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大柴胡汤对Hepa1-6细胞及小鼠肝脏中白细胞介素-6(IL-6)mRNA的影响.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、信号转导与转录活化因子3(STAT3)相关通路蛋白的表达.结果:MTT比色法、结晶紫染色结果显示,与空白组比较,大柴胡汤组(500、1 000 mg·L-1)第4、8天时能够显著性地抑制Hepa1-6细胞增殖(P＜0.05),呈浓度和时间依赖性;体内实验结果显示,大柴胡汤给药14 d后,与模型组比较,大柴胡汤组(1.875 g·kg-1)的肿瘤细胞多呈高分化,异型不明显,坏死区少见.网络药理学结果显示大柴胡汤作用于肝癌的核心基因,以调控肝癌微环境为主如IL-6、白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等;信号通路以肝癌生长、分化、免疫和炎症为主,如MAPK、STAT3等.在Hepa1-6细胞中,与空白组比较,大柴胡汤(1 000 mg·L-1)第1、2、4、8天能抑制IL-6 mRNA表达(P＜0.05).与模型组比较,大柴胡汤组(0.625、1.875 g·kg-1)处理的小鼠肝脏中IL-6 mRNA表达下降(P＜0.05).体外实验显示,与空白组比较,大柴胡汤(1 000 mg·L-1)第4、8天和大柴胡汤(500、1 000 mg·L-1)能够抑制Hepa1-6细胞中细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)和STAT3的磷酸化表达(P＜0.05),呈时间和浓度依赖性;体内实验结果显示,与模型组比较,大柴胡汤组(0.625、1.875 g·kg-1)能显著性地抑制p38 MAPK和STAT3的磷酸化(P＜0.05).结论:大柴胡汤通过调控p38 MAPK/IL-6/STAT3信号轴,从而达到抑制肝癌的活性.

关键词：肝癌、大柴胡汤、p38丝裂原活化蛋白激酶、白细胞介素-6、信号转导与转录活化因子3

所属期刊栏目：28

分类号：R22;R242;R2-031;R285.5(中医基础理论)

资助基金：国家自然科学基金;中华中医药学会青托人才项目;上海中医药大学杏林学者跟踪计划项目

在线出版日期：2022-08-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：19-28