10.13422/j.cnki.syfjx.20220921
桦木酸通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导人结肠癌细胞SW620凋亡及自噬
目的:研究桦木酸对人结肠癌细胞SW620凋亡和自噬的影响及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在其中的调控作用.方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,确定最佳给药时间及给药浓度,用于后续实验;设置空白组、桦木酸低、中、高浓度组.采用苏木素-伊红(HE)染色观察桦木酸对SW620细胞形态的影响.采用Annexin-V/碘化丙啶(PI)双染法检测SW620细胞凋亡率.分别采用Hoechst33258染色及细胞自噬染色(MDC)观察细胞凋亡和自噬体发生情况.采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、活化的胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3),微管相关蛋白Ⅰ轻链3 Ⅰ(LC3 Ⅱ)、自噬关键分子酵母Atg6同系物-l(Beclin-l)、p62、磷酸化(p)-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达.结果:桦木酸以浓度、时间依赖性的方式抑制SW620、HT29、HCT116细胞的活性;与桦木酸给药24h比较,W620、HT29、HCT116细胞给药48 h细胞活性明显降低(P＜0.05,P＜0.01),给药48h的半数抑制浓度(IC50)显著降低(P＜0.01),其中SW620细胞给药48h的IC5o最小.HE染色、Hoechst33258染色显示,桦木酸组可见浓度依赖性细胞凋亡;MDC染色可见细胞自噬体数量增加.与空白组比较,桦木酸低、中、高浓度组细胞凋亡率显著升高(P＜0.01).与空白组比较,桦木酸低、中、高浓度组Bax、Caspase-9、cleavedCaspase-3、LC3Ⅰ蛋白表达水平明显升高(P＜0.05,P＜0.01),桦木酸中、高浓度组Beclin-1蛋白表达显著升高(P＜0.01);桦木酸低、中、高浓度组p62、p-Akt、p-PI3K、p-mTOR蛋白表达显著降低(P＜0.01).结论:桦木酸对SW620细胞活性有明显的抑制作用,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路从而诱导人结肠癌细胞SW620的凋亡及自噬有关.
桦木酸、磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路、结肠癌细胞、SW620、凋亡、自噬
28
R22;R242;R2-031;R2-0;R285.5(中医基础理论)
东莞市社会发展科技项目20211800905502
2022-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
99-106
