10.13422/j.cnki.syfjx.20221089
槲皮素通过激活自噬对LPS诱导的软骨细胞基质代谢及炎症的影响
目的:从细胞自噬角度探讨槲皮素调控膝骨关节炎(KOA)软骨细胞外基质代谢及炎症反应的作用机制.方法:提取软骨细胞、传代培养,及用Ⅱ型胶原蛋白(Collagen Ⅱ)免疫荧光染色鉴定原代细胞;将脂多糖(LPS)诱导的软骨细胞分为空白组(不做任何处理)、模型组(10 mg·L-1 LPS处理48 h)、槲皮素低、中、高剂量组(10 mg·L-1 LPS处理48 h+50、100、150 mmol·L-1槲皮素处理24 h).细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测LPS(2.5、5、7.5、10、12.5 mg-L-1)对软骨细胞不同时间(24、48、72 h)增殖的抑制作用;槲皮素(50、100、150、200 mmol·L-1)对LPS诱导的软骨细胞不同时间(12、24、48 h)增殖的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)和泛素结合蛋白p62(p62)蛋白表达.用3-甲基腺嘌呤(3-MA)干预LPS诱导的软骨细胞,分为空白组(不做任何处理)、模型组(10 mg·L-1 LPS)、槲皮素组(模型组+100mmol·L-1槲皮素)、3-MA 组(模型组+100 μmol·L1 3-MA)、3-MA+槲皮素组(模型组+100 μmnol·L-1 3-MA+100 mmol·L-1槲皮素),先用LPS处理48 h后,3-MA处理2 h,再用槲皮素干预24 h.酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;WB检测基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMPl)蛋白表达.结果:Collagen Ⅱ免疫荧光鉴定结果示,所提取的细胞符合软骨细胞特征;CCK-8法筛选LPS最佳造模质量浓度为10mg·L-1、48 h,槲皮素最佳浓度为100 mmol·L-1、24 h;WB结果示,与空白组比较,模型组LC3 Ⅱ表达显著降低(P＜0.01),p62表达显著升高(P＜0.01),与模型组比较,槲皮素低、中、高剂量组LC3Ⅱ表达显著升高(P＜0.01),其槲皮素中剂量组最显著,p62表达显著降低(P＜0.01),其槲皮素中剂量组最显著;与空白组比较,模型组MMP-13表达明显升高(P＜0.05),TIMP1表达显著降低(P＜0.01);与模型组比较,槲皮素组、3-MA+槲皮素组MMP-13表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01),其中槲皮素组最显著,TIMP1表达显著升高(P＜0.01),其中槲皮素组最显著.倒置显微镜下观察软骨细胞形态学改变结果示,槲皮素可恢复受损的软骨细胞形态;CCK-8检测各组细胞增殖结果示,与空白组比较,模型组软骨细胞增殖明显被抑制(P＜0.01);与模型组比较,槲皮素组、3-MA+槲皮素组软骨细胞增殖显著升高(P＜0.01),其中槲皮素组最显著;ELISA检测结果示,与空白组比较,模型组IL-1β、TNF-α含量显著升高(P＜0.01);与模型组比较,槲皮素组、3-MA+槲皮素组IL-1β、TNF-α含量明显降低(P＜0.05,P＜0.01),其中槲皮素组降低最显著.结论:槲皮素可促进LPS诱导的软骨细胞增殖,调控软骨细胞外基质合成与代谢平衡,抑制炎症反应,恢复软骨细胞功能,其机制可能与槲皮素激活细胞自噬有关.
槲皮素、自噬、软骨细胞、脂多糖、膝骨关节炎
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R2-0;R22;R285.5;R289;R33
中医药传承与创新百千万人才工程岐黄工程岐黄学者项目;甘肃省科技计划项目
2022-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
92-98
