连翘脂素通过调控P2X7R/NF-KB/NLRP3炎性小体信号通路缓解LPS/ATP诱导的L02细胞炎症

摘要：

目的:为研究连翘脂素(Phillygenin,PHI)对脂多糖(LPS)和腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)联合诱导L02细胞中的抗炎药效和对P2X7受体(P2X7R),NOD样蛋白结构域受体3(NLRP3)和核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法:本研究采用先给予100 μg·L-1 LPS处理24h后,再使用5 mmoL·L-1 ATP5 h建立L02细胞炎症模型.给药组在给予LPS处理的同时给予不同浓度PHI(100、50、25mg·L-1)培养6h,随后换液,继续用LPS处理18 h,ATP处理5 h后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测L02细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、P2X7R、NLRP3、胱天蛋白酶-1 前体(pro-Caspase-1)、裂解胱天蛋白酶-1(cleaved Caspase-1)、NF-κB、NF-κB抑制蛋白 α(IκBα)mRNA和蛋白表达.通过分子对接实验预测P2X7R与PHI能否结合,以及DCFH-DA活性氧(ROS)荧光探针检测细胞中ROS的累积.采用小干扰核糖核酸(siRNA)沉默P2X7R,并随后通过Real-time PCR检测IL-1β、IL-18、P2X7R、NLRP3、Caspase-1、NF-KB、IκBαmRNA表达情况.结果:Real-time PCR和Western blot分析显示,与空白组比较,模型组IL-1β、IL-18的表达均有所升高(P＜0.05);与模型组比较,给药组明显下调了 IL-lβ、IL-18 mRNA和蛋白的表达(P＜0.05).分子对接结果显示PHI与P2X7R有较好的结合作用.Real-time PCR和Western blot分析显示,与空白组比较,模型组P2X7R的表达明显上调(P＜0.05);与模型组比较,给药组下调了 P2X7R mRNA和蛋白表达(P＜0.05).ROS荧光探针分析显示,与空白组比较,ROS的含量明显升高(P＜0.05);与模型组比较,给药组明显降低了 ROS的积累(P＜0.05).Real-timePCR和Western blot分析显示,与空白组比较,模型组NLRP3炎性小体,NF-κB的表达明显升高(P＜0.05);与模型组比较,给药组明显降低NLRP3、cleaved-Caspase-l和上调NF-κB、IκBα mRNA及蛋白表达(P＜0.05).Real-time PCR分析显示,与模型组比较,siRNA沉默P2X7R后,IL-1β、IL-18、P2X7R、NLRP3、Caspase-1、NF-KB、IκBα mRNA表达明显降低(P＜0.05),PHI具有同样的作用,二者合用后,基因表达进一步下降.结论:P2X7R为NF-KB/NLRP3信号通路的上游,PHI可能是通过下调P2X7R从而抑制NF-KB/NLRP3信号通路的表达从而缓解LPS/ATP诱导的L02细胞炎症,提示P2X7R可能是PHI发挥抗炎作用的靶标.

关键词：连翘脂素、P2X7R、L02细胞、NOD样蛋白结构域受体3(NLRP3)炎性小体、核转录因子-κB(NF-κB)

所属期刊栏目：28

分类号：R2-0;R22;R285.5;R289;R33

资助基金：国家自然科学基金;四川省科技计划项目;成都中医药大学杏林学者研究推进项目

在线出版日期：2022-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：61-69