苓桂术甘汤含药血清通过PI3K/Akt信号通路保护H2O2诱导的H9c2细胞损伤

摘要：

目的:研究苓桂术甘汤含药血清对H2O2诱导的H9c2细胞损伤的保护作用及与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的关系.方法:采用血清药理学方法,制备空白血清及苓桂术甘汤含药血清.体外培养H9c2细胞,分为空白组、H2O2组、20％空白血清组、20％苓桂术甘汤含药血清组,给予相应药物处理12 h,再加入100 μmol·L1 H2O2继续培养6 h后进行检测.采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测20％苓桂术甘汤含药血清对H2O2诱导的H9c2细胞增殖活性的影响,荧光探针法检测线粒体活性氧(ROS)水平,比色法检测氧化应激标志物丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测PI3K、AktmRNA水平,流式细胞术检测细胞凋亡率.加入PI3K抑制剂LY294002后对线粒体ROS、LDH、GSH-Px水平,PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达及细胞凋亡率进行检测.结果:与空白组比较,H2O2诱导后细胞活力显著降低(P＜0.01),线粒体ROS、MDA及LDH水平显著增加(P＜0.01),CAT、GSH-Px水平则显著下降(P＜0.01),PI3K、Akt蛋白的磷酸化及mRNA水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01),细胞凋亡率显著升高(P＜0.01).与H2O2组比较,苓桂术甘汤含药血清能够提高H9c2细胞活力,显著降低线粒体ROS、MDA及LDH水平(P＜0.01),并显著提高CAT、GSH-Px水平(P＜0.01),促进PI3K、Akt的磷酸化及mRNA的表达(P＜0.05,P＜0.01),显著减少细胞凋亡率(P＜0.01).苓桂术甘汤含药血清与抑制剂LY294002联用后,逆转了苓桂术甘汤含药血清对H9c2细胞的上述作用(P＜0.05,P＜0.01).结论:苓桂术甘汤含药血清保护H2O2诱导的H9c2细胞损伤可能与调控PI3K/Akt信号通路减轻氧化应激及细胞凋亡有关.

关键词：苓桂术甘汤、氧化应激、凋亡、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路

所属期刊栏目：28

分类号：R2-0;R22;R285.5;R289;R33

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金;安徽省高校自然科学研究重点项目;安徽中医药大学自然科科学金重点项目

在线出版日期：2022-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

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