10.13422/j.cnki.syfjx.20220640
大黄灵仙方调控TAK1与TRAF6相互作用及共定位对胆管细胞炎症反应的影响
目的:观察大黄灵仙方(DHLX)对大鼠胆管上皮细胞的修复作用,探讨其作用机制是否通过调节转化生长因子-β(TGF-β)激活激酶1(TAK1)与肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的相互结合,调控核转录因子-μB(NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路活化而发挥作用.方法:将20只SD大鼠随机分为正常组和DHLX组,分别予生理盐水及DHLX(320 mg·kg-1·d-1)灌胃8d,制备正常血清及含DHLX血清;从正常SD大鼠中提取胆管上皮细胞,取胆管上皮细胞分为9组:正常组、模型组(20 mg·L-1)、脂多糖(LPS)+DHLX组(20 mg·L-1+10％含药血清)、LPS+PDTC组(20 mg· L-1+200 μmol·L-1)、LPS+SB203580组(20 mg·L-10.5 μmol·L-1)、LPS+PDTC+SB203580组(20 mg·L-1200 μmol· L-1+0.5 μmol·L-1)、LPS+PDTC+DHLX组(20 mg·L-1+200 μmol· L-110％含药血清)、LPS+SB203580+DHLX组(20 mg·L-10.5 μmol·L-1+10％含药血清)、LPS+PDTC+SB203580+DHLX组(20 mg·L-1+200 μmol·L-1+0.5 μmol·L-110％含药血清);显微镜下观察药物干预后各组细胞的形态学变化,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞中白细胞介素(IL)-1β与IL-6的表达量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中TAK1与TRAF6蛋白表达水平,免疫共沉淀技术检测TAK1与TRAF6的相互作用,激光共聚焦显微镜观察TAK1与TRAF6在细胞中的分布及共定位情况.结果:LPS作用后,细胞突触减少,胞体变圆变小,用药后各组细胞形态趋向正常;与正常组比较,模型组IL-1β和IL-6表达量明显上升(P＜0.05),TAK1表达量降低而TRAF6的表达量升高(P＜0.05),TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量呈降低趋势;与模型组比较,LPS+DHLX组IL-1β和IL-6表达量明显降低(P＜0.05),TAK1表达量升高而TRAF6表达量降低(P＜0.05),TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量显著增加(P＜0.01),两蛋白共定位于细胞质中;与LPS+DHLX组比较,其余各组IL-1β和IL-6表达量均明显降低(P＜0.05,P＜0.01),通路阻滞剂干预后各组TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量明显降低(P＜0.05),通路阻滞剂联合DHLX干预后各组TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量明显增加(P＜0.05),两蛋白在细胞质中存在共定位但不明显.结论:在LPS诱导的胆管细胞炎症反应中,TAK1与TRAF6相互结合呈减弱趋势,大黄灵仙方可逆转此现象,其作用机制可能与促进TAK1与TARF6的相互结合从而抑制NF-κB/MAPK信号通路活化有关.
胆管炎症、大黄灵仙方、转化生长因子-β (TGF-β)激活激酶1(TAK1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、相互作用、核转录因子-κB(NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路
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R2-0;R285;R33;R318.14
广西自然科学基金;广西自然科学基金;广西自然科学基金;广西中医药大学岐黄工程高层次人才团队培育项目;广西中医药大学研究生创新课题项目
2022-03-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
92-99
