哈蟆油蛋白酶解物对乙醇诱导的L-02细胞损伤的作用

摘要：

目的:研究哈蟆油蛋白酶解物(ORPH)对乙醇诱导的L-02细胞损伤相关通路蛋白表达影响的作用机制研究.方法:复合酶解法制备ORPH,以400 mmo1·L-1乙醇建立L-02肝细胞损伤模型,细胞增殖与活性检测试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化,JC-1/Hochest染色观察形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路及细胞焦亡相关蛋白在L-02肝细胞中的表达变化,研究ORPH对乙醇所致肝细胞损伤的保护作用及机制.结果:CCK-8法结果表明400 mmol·L-1乙醇可在12h内明显引起L-02肝细胞损伤;与空白组比较,模型组L-02细胞活力显著下降(P＜0.01),细胞处于G0/G1期的细胞占比显著升高(P＜0.01),细胞总凋亡率显著升高(P＜0.01),线粒体膜电位下降;B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),细胞色素C(CytC),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)凋亡相关蛋白的表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01),MAPK信号通路相关蛋白c-Jun氨基末端激酶(JNK),p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)明显上调(P＜0.05,P＜0.01),且焦亡蛋白Caspase-1,白细胞介素-1β(IL-1β)表达明显增强(P＜0.05),Bel-2显著下降(P＜0.01);与模型组比较,ORPH处理组细胞周期阻滞有所改善(P＜0.05,P＜0.01),细胞总凋亡率显著下降(P＜0.01),线粒体膜电位升高,呈剂量相关性;Bax,CytC,Caspase-3蛋白表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01),Bcl-2蛋白表达升高(P＜0.05,P＜0.01),MAPK信号通路相关蛋白及焦亡相关蛋白表达均呈下降趋势(P＜0.05,P＜0.01).结论:ORPH可通过抑制乙醇诱导L-02肝细胞引起的氧化应激肝细胞损伤,改善恢复线粒体膜电位,降低线粒体介导的细胞凋亡通路蛋白的表达,并抑制MAPK信号通路相关蛋白、焦亡通路相关蛋白表达,从而降低乙醇诱导L-02肝细胞的线粒体功能障碍及炎症反应并减轻氧化应激,对酒精性肝损伤起到治疗作用.

关键词：哈蟆油蛋白酶解物(ORPH)、酒精性肝细胞损伤、氧化应激、线粒体凋亡、炎症反应

所属期刊栏目：27

分类号：R2-0;R22;R285.5;R33

资助基金：吉林省科技发展项目20170309005YY

在线出版日期：2021-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：43-50