加味小陷胸汤水提物通过Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路抑制TGF-β1介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化及侵袭迁移

摘要：

目的:观察加味小陷胸汤水提物对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)及侵袭迁移能力的影响,探讨其调控Wnt5a/Ca2+/活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T-cells,NFAT)信号通路抑制MGC-803细胞EMT和侵袭转移的作用机制.方法:用TGF-β1(10μg-L-1)诱导人胃癌MGC-803细胞EMT及侵袭转移模型,分别采用Transwell小室实验、划痕愈合实验、蛋白免疫印迹和免疫荧光法检测细胞侵袭迁移能力,EMT标志蛋白表达和Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路关键蛋白表达以及细胞内Ca2+浓度.结果:TGF-β1能够显著增强MGC-803细胞侵袭迁移能力(P＜0.01),下调上皮细胞黏附分子(E-cadherin)水平(P＜0.01),上调间质细胞标志蛋白(N-cadherin),转录因子(Snail)和细胞骨架蛋白(Vimentin)表达(P＜0.01),并诱导细胞Wnt5a,钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN),活化 T 细胞核因子 1(nuclear factor of activated T-cells1,NFAT1)总蛋白,磷酸化蛋白 p-NFAT1 和NFAT1核蛋白表达上调及Ca2+胞内蓄积(P＜0.01);而加味小陷胸汤(10,20,40 mg·L-1)均可明显抑制这一现象,且40 mg-L-1效果最佳(P＜0.05,P＜0.01);Wnt5a/?a2+/NFAT信号通路特异性抑制剂(R)-(+)-Bay-K-8644与加味小陷胸汤40 mg·L-1均可明显抑制 MGC-803细胞经 TGF-β1介导后的侵袭迁移,上调 E-cadherin水平,下调 N-cadherin,Snail,Vimentin,Wnt5a,CaN,NFAT1蛋白表达及减少Ca2+在胞内蓄积(P＜0.05,P＜0.01),且(R)-(+)-Bay-K-8644协同加味小陷胸汤40mg-L-1抑制作用效果更强(P＜0.05,P＜0.01).结论:以上结果提示加味小陷胸汤能通过Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路抑制TGF-β1介导的EMT,进而降低MGC-803细胞侵袭迁移能力.

关键词：加味小陷胸汤水提物、人胃癌MGC-803细胞、上皮-间质转化、侵袭迁移、Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路

所属期刊栏目：27

分类号：R22;R242;R2-031;R285.5(中医基础理论)

资助基金：国家自然科学基金81573864

在线出版日期：2021-03-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：37-46