β-catenin RNA干扰对黄精丸治疗学习记忆障碍小鼠的信号通路机制的影响

摘要：

目的:用侧脑室β-连环蛋白(β-catenin)RNA干扰(RNAi)黄精丸治疗D-半乳糖联合东莨菪碱模拟的阿尔茨海默病(AD)小鼠,以探讨黄精丸防治AD的神经保护信号分子机制.方法 :81只雄性昆明种小鼠随机分成正常组,假手术组,AD模型组,多奈哌齐组,黄精丸+scrambled组(即β-catenin RNA干扰组),黄精丸+RNAi组,黄精丸组,多奈哌齐组和黄精丸组每组小鼠8只,其余各组每组13只.连续5周采用D-半乳糖联合东莨菪碱注射法给后5组的各小鼠制作AD模型.造模后第4周第1天,给黄精丸+RNAi组各小鼠右侧脑室一次性注射聚乙烯亚胺(PEI-LMW)/β-catenin siRNAs纳米络合物0.75 μL以脑内β-catenin RNA干扰处理,黄精丸+scrambled组各小鼠右侧脑室一次性注射络合复合物0.75 μL以作β-catenin干扰对照,假手术组各小鼠侧脑室内注射生理盐水0.75 μL.侧脑室注射2周后,经确认小鼠β-cateninRNAi成功,再给多奈哌齐组小鼠灌胃多奈哌齐(6.5×10-4g·kg-1),给黄精丸+scrambled组,黄精丸+RNAi组,黄精丸组各小鼠灌胃黄精丸(2.5g·kg-1),持续4周.灌胃结束后,采用跳台实验评价各小鼠的学习记忆能力差异;尼氏染色计数各组小鼠大脑皮层S1Tr区及海马CA1,CA3区神经元数量差异;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组小鼠大脑Wntl,蓬松蛋白极性片段2(DVL2),糖原合成酶激酶3β(GSK-3β),β-catenin,细胞周期蛋白D1(CyclinD1)mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠大脑Wnt1,DVL2,GSK-3β,β-catenin,CyclinD1蛋白表达水平.结果 :AD小鼠侧脑室内β-catenin RNAi可明显抑制其脑内β-catenin表达,可成功实现目的基因沉默.与正常组比较,AD模型组小鼠学习与记忆成绩显著下降,跳台的错误次数增多(P＜0.01),大脑皮层S1Tr区及海马CA1,CA3区神经元神经元数量显著减少(P＜0.01),大脑Wntl,DVL2,β-catenin,CyclinD,mRNA及蛋白表达水平均显著下降(P＜0.01),GSK-3βmRNA及蛋白表达水平显著升高(P＜0.01).与AD模型组比较,黄精丸组小鼠的学习与记忆成绩均显著升高,跳台错误次数均显著降低,大脑皮层S1Tr区及海马CA1,CA3区神经元数量显著升高,大脑Wnt1,DVL2,β-catenin,CyclinD,mRNA及蛋白表达水平均显著升高,GSK-3βmRNA及蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).与黄精丸组比较,黄精丸+RNAi组小鼠的学习与记忆成绩均下降,跳台错误次数显著升高(P＜0.01),大脑皮层S1Tr区及海马CA1,CA3区神经元数量显著降低(P＜0.01),大脑Wnt1,DVL2,GSK-3β mRNA及蛋白表达水平无明显变化,β-catenin,CyclinD,mRNA及蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).结论 :黄精丸可通过激活Wnt/β-catenin信号通路转导发挥治疗AD作用.

关键词：RNA干扰、黄精丸、阿尔茨海默病、Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路

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分类号：R2-0;R22;R285.5;R289

资助基金：江西省双一流学科中医学建设项目;江西中医药大学校级硕士研究生创新专项项目;江西省教育厅科技项目;江西省卫生健康委中医药科研计划课题

在线出版日期：2021-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：53-62