健脾消癌方对结肠癌外泌体诱导HFL1活化成CAFs的影响

摘要：

目的:探讨健脾消癌方对人结肠癌细胞(HCT116)来源外泌体诱导正常人胚肺成纤维细胞(HFL1)向肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)活化的影响.方法:以13.1 g·kg-1的健脾消癌方灌胃SD大鼠以制备含药血清,采取超高速离心法分别提取含10％无外泌体血清培养的HCT116细胞外泌体及含20％健脾消癌方含药血清培养的HCT116细胞外泌体,纳米颗粒跟踪分析仪(Zetaview)检测外泌体的粒径分布,蛋白免疫印迹法(Western blot)鉴定外泌体的标志蛋白凋亡转接基因2互作蛋白X(Alix),热休克蛋白70(HSP70),肿瘤易感基因101蛋白(TSG101),荧光显微镜观察HFL1对细胞膜染色试剂盒(PKH67)标记的外泌体的摄取情况;将HFL1细胞分6组:空白组,转化生长因子-β1(TGF-β1)组,TGF-β1联合HCT116外泌体2 mg·L-1组,TGF-β1联合HCT116外泌体4 mg· L-1组,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体2 mg· L-1组,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体4 mg·L-1组,均干预48 h,Western blot和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白和mRNA的表达水平.结果:Zetaview检测粒径分布主要集中在50～100 nm,结合标志蛋白Alix,HSP70和TSG101的表达证实其为外泌体,HFL1细胞与外泌体共孵育后,荧光显微镜下可看到大量外泌体被HFL1细胞所摄取;与空白组比较,TGF-β31组和TGF-β1联合HCT116外泌体组的α-SMA蛋白及mRNA表达水平升高(P＜0.05);与TGF-β1联合HCT116外泌体组比较,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体组的α-SMA蛋白及mRNA水平下降(P＜0.01).结论:人结肠癌细胞外泌体联合TGF-β1可诱导HFL1.活化成CAFs,健脾消癌方可通过影响α-SMA的表达水平而降低HFL1的活化能力从而达到拮抗结肠癌肺转移的作用.

关键词：结肠癌、外泌体、正常人胚肺成纤维细胞、肿瘤相关成纤维细胞、α-平滑肌肌动蛋白、健脾消癌方

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分类号：R22;R242;R2-031;R285.5(中医基础理论)

资助基金：国家自然科学基金;中央引导地方科技发展专项;湖南省科技创新计划项目;研究生培养质量工程项目

在线出版日期：2020-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：40-46