桃核承气汤不同有效部位对TGF-β1诱导的HK-2细胞分泌与降解细胞外基质的影响

摘要：

目的:探讨桃核承气汤不同有效部位对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)中细胞外基质合成与降解的影响.方法:采用系统溶剂法萃取70％乙醇提取的桃核承气汤,得到石油醚萃取物质部位,三氯甲烷萃取物质部位,乙酸乙酯萃取物质部位,正丁醇萃取物质部位,萃余水相物质部位,多糖物质部位和芒硝物质部位.利用TGF-β1诱导HK-2细胞构建纤维化模型,以不同质量浓度(0,50,100,200,400,800 mg·L-1)桃核承气汤各部位干预细胞,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清液胶原蛋白I α1(Col-I α1),纤维粘连蛋白(FN)含量,初步筛选得到主要有效物质部位进行后续实验验证.细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK-8)确定筛选出的有效部位的最佳浓度;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胶原蛋白-I (Col-I),胶原蛋白-Ⅲ(Col-Ⅲ),基质金属蛋白酶-2(MMP-2),基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP2),结缔组织生长因子(CTGF)蛋白的表达水平;免疫荧光检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测纤溶酶原激活抑制剂-1 (PAI-1) mRNA的表达.结果:ELISA检测结果显示,与模型组比较,乙酸乙酯、正丁醇、三氯甲烷萃取部位质量浓度为200,400 mg· L-1时能显著降低Col-Ⅰ α1和FN含量(P＜0.05,P＜0.01).CCK-8检测结果显示,各组药物干预质量浓度为400,800 mg· L-1时显著抑制细胞活性(P＜0.01).Western blot检测结果显示,与模型组比较,乙酸乙酯、三氯甲烷萃取部位均能降低Col-Ⅰ,Col-Ⅲ,TIMP2和CTGF蛋白的表达,上调MMP-2的表达(P＜0.05),正丁醇萃取部位作用效果更显著(P＜0.01).免疫荧光结果显示,乙酸乙酯、三氯甲烷萃取部位均能抑制α-SMA的表达(P＜0.05),正丁醇萃取部位抑制作用更显著(P＜0.01).Real-time PCR检测发现,乙酸乙酯、三氯甲烷萃取部位均能抑制PAI-1 mRNA的表达(P＜0.05),正丁醇部位更显著(P＜0.01).结论:本研究初步筛选出桃核承气汤抗肾脏纤维化的主要有效物质部位为乙酸乙酯萃取物质部位、正丁醇萃取物质部位和三氯甲烷萃取物质部位,其中正丁醇萃取物质部位活性最强,其作用机制可能与调节TGF-β1诱导的HK-2细胞分泌细胞外基质(ECM)的合成与降解有关.

关键词：肾脏纤维化、桃核承气汤、有效部位、细胞外基质

所属期刊栏目：26

分类号：R2-0;R22;R285.5;R289

资助基金：武汉市科技计划;鄂卫生计生通项目

在线出版日期：2020-09-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：127-134