健脾养正方通过抑制PKM2调控的有氧糖酵解对大肠癌HCT116细胞凋亡和EMT的影响

摘要：

目的:观察健脾养正方通过下调丙酮酸激酶同工酶M2(PKM2)蛋白表达而抑制有氧糖酵解过程,从而对大肠癌HCT116细胞的促凋亡和抑制上皮间质转化(EMT)的作用机制.方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测健脾养正方对大肠癌HCT116细胞增殖的影响;通过流式细胞术检测健脾养正方(2.0,4.0,8.0g·L-1)对HCT116细胞诱导凋亡的影响;通过细胞划痕和细胞侵袭实验(Transwell)观察健脾养正方(2.0,4.0,8.0g·L-1)对HCT116细胞的迁移和侵袭能力的影响;通过乳酸(LD)测试盒和葡萄糖测定试剂盒分别检测健脾养正方(2.0,4.0,8.0 g·L-1)对HCT116细胞糖酵解代谢的影响;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和EMT相关蛋白上皮型钙黏蛋白(E-cadherin),神经型钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin)及糖酵解关键蛋白PKM2的表达;结果:MTT比色法显示,与空白组比较,健脾养正方作用HCT116细胞48 h,随着药物浓度增加,健脾养正方对HCT116细胞增殖抑制效应也增加,且在质量浓度为4.0g·L-1时,HCT116细胞抑制率在53.87％左右,从而选取健脾养正方2.0,4.0,8.0g·L-1作为低、中、高剂量组进行研究;细胞流式结果显示,与空白组比较,健脾养正方低、中、高剂量组均明显诱导HCT116细胞凋亡(P＜0.05),且随给药浓度增加,诱导细胞凋亡作用更明显(P＜0.05);细胞划痕和Transwell显示,与空白组比较,健脾养正方低、中、高剂量组均具有抑制HCT116细胞迁移和侵袭作用(P＜0.05),随给药浓度增加,作用更明显(P＜0.05);乳酸和葡萄糖的测定显示,与空白组比较,随给药浓度增加,健脾养正方低、中、高剂量组细胞产生的乳酸量逐渐减少(P＜0.05),葡萄糖利用量亦逐渐降低(P＜0.05);Western blot显示,与空白组比较,健脾养正方低、中、高剂量组E-cadherin,Bax蛋白表达量上调(P＜0.05),N-cadherin,Vimentin,Bcl-2及PKM2蛋白表达量下调(P＜0.05).结论:健脾养正方可有效诱导大肠癌HCT116细胞凋亡及抑制EMT,其机制可能与其通过下调PKM2蛋白表达而抑制HCT116细胞的有氧糖酵解途径有关.

关键词：健脾养正方、HCT116细胞、凋亡、上皮间质转化(EMT)、丙酮酸激酶同工酶M2(PKM2)、有氧糖酵解

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分类号：R22;R242;R2-031;R285.5(中医基础理论)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;国医大师传承工作室;全国名中医传承工作室建设项目;研究生科研创新项目

在线出版日期：2020-08-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：93-100